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蜀科高速冷凍離心機在DNA提取中的重要作用

更新時間:2018-10-12      點擊次數(shù):4052

  DNA提取的生物樣品分離實驗,在基因工程和蛋白質(zhì)工程等分子生物學(xué)領(lǐng)域和司法鑒定領(lǐng)域應(yīng)用廣。在DNA提取中,高速冷凍離心機發(fā)揮著重要的作用,因其中關(guān)鍵的一點是溫度的控制。
  以實驗為例,在細胞的細胞核中,DNA與蛋白質(zhì)結(jié)合形成染色體,因此提取DNA時既要將蛋白質(zhì)等物質(zhì)除盡,又要盡可能保持DNA分子的完整性,即保持DNA帶不發(fā)生斷裂,無外源污染。實驗在4℃和常溫條件下分別進行。4℃條件下采用高速冷凍離心機,而常溫條件采用小型臺式高速離心機,實驗結(jié)果顯示,4℃條件提取的DNA條帶整齊無拖帶,而常溫提取的DNA有明顯的拖帶現(xiàn)象,表明前者的DNA片段完整無斷裂,未被污染,且分子大小相同,而后者的DNA有部分已斷裂。在本實驗采用的有機法中,由于酚類容易被氧化,產(chǎn)生醌、二羧酸等氧化物,可破壞中的磷酸二酯鍵,并引起DNA鏈的交聯(lián),常溫條件下由于離心機轉(zhuǎn)子高速旋轉(zhuǎn)產(chǎn)生大量熱,加速了酚的氧化,并增加了血液中細胞釋放的內(nèi)源酶的活性,導(dǎo)致部分基因組DNA降解。而在4℃條件下提取的DNA由于溫度低,酚不易被氧化,內(nèi)源酶活性較低,因此能夠保證DNA的完整性。
  同理,對生物活性保留要求很苛刻的技術(shù)項目,離心萃取的溫度都需要嚴(yán)格符合要求,超過溫度區(qū)間范圍會對活性酶的指標(biāo)有影響或者溫度過低導(dǎo)致凝結(jié)。
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